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果汁中嗜热嗜酸菌的检测方法——膜过滤法和涂布法

2018-09-30 浏览次数:152

◆背景

 

  此方法用于分析检测果汁成品或原料。此文件细节性地描述了嗜热嗜酸菌(以下缩写为TAB)的定量检测和其确认测试。此文件含有关于TAB的定义,描述和其他的相关信息。

 

 

◆原理

 

  在浓缩果汁,特定甜味剂和一些饮料中,TAB主要以孢子(脂环酸芽孢杆菌)的形式存在。这些孢子的活性往往在高温杀菌,并且有合适的生长环境的条件下增长。TAB不会在冷饮中生长。如果环境允许,TAB会生成一种名为愈创木酚的化合物。此化合物会给产品和原料带来一种药的味道。基于此药味,样品被认为是腐坏了。

 

 

◆原料和标准品

 

  a.酵母提取物(212759,BD)

  b.葡萄糖(215530,BD)

  c.可溶性淀粉(217820,BD)

  d.琼脂(214530)

  e.愈创木酚测试套装(Cosmo Bio Co ., Ltd)

 

 

◆仪器设备

 

  a.水浴锅

  b.培养箱

 

 

◆实验过程

 

a.培养基(YSG)配制

  i.溶液A:在1L烧杯中称量2g酵母提取物,1g葡萄糖和2g可溶性淀粉。加入500mL去离子水溶解。加入适量1N的盐酸或硫酸,使pH调整至3.7±0.1。

  ii.溶液B:取一个新的1L的烧杯。称量15g琼脂并加入500mL去离子水加热溶解。

  iii.在121°C下蒸汽灭菌15分钟。

  iv.当溶液A和B的温度都降至47±0.2°C时,在无菌条件下将溶液A倒入溶液B中混合。

  v.在培养皿中倒入15至20mL配置完成的培养基(YSG)并使其凝固。将浇好的培养皿放入冰箱中存放。保质期为一个月。

b.样品准备(热击)

  i.在试管中准备9mL的无菌水,在无菌条件下加入1mL浓缩果汁并混匀。

  ii.将试管置于80°C水浴锅中热击。当样品温度到达80±0.2°C时计时10分钟。然后快速降温至室温。

  iii.如果样品为单倍果汁,则无需稀释。

c.样品分析方法

i.涂布法(用于不可过滤的样品):

  1.向固体YSG培养基中加入1mL热击过的稀释样品(单倍果汁无需稀释,直接取1mL样品)。将样品均匀涂抹在培养基表层。

  2.将平板正放于45±2°C培养箱中培养一天。

  3.一天后倒置平板并继续培养4天。

ii.膜过滤法(用于可过滤样品):

  1.在50mL无菌水中加入热击过的稀释样品(单倍果汁无需稀释,直接取10mL样品加入)。混匀后用0.45µm滤膜过滤。

  2.在无菌条件下将滤膜转移至固体YSG培养基上。

  3.倒置平板,在45±2°C培养箱中培养5天。

d.结果分析

  i.如果样品中菌落计数小于原料标准要求,用愈创木酚测试套装进一步检测会有无产生邻甲氧基苯酚的微生物。如果菌落计数大于原料标准要求,则直接认定为不合格样品。

  ii.阳性平板应通过显微镜镜检来确定脂环酸芽孢杆菌的存在。

  iii.每一套测试样品需要有控制平板做比对。包括空气,阳性菌对比,YSG培养基和样品所使用的无菌水。

e.愈创木酚测试套装(供应商:Cosmo Bio Co., Ltd)

  i.用接种环取10 µL不含孢子的新鲜菌落,悬浮于含有“Va-YSG 试剂 (2mL)”的试管中(≥1×108cfu/mL)。

  ii.在45±1°C下培养3小时或过夜。

  iii.加入1mL邻甲氧基苯酚测试套装试剂1。

  iv.加入20µL邻甲氧基苯酚测试套装试剂2。

  v.加入20µL邻甲氧基苯酚测试套装试剂3。

  vi.混匀并放置5-10分钟。

  vii.观察溶液的颜色变化。在10分钟内读取数据。

  viii.阳性控制:取2mL纯净水和100µL阳性控制并混合。重复步骤iii-vii。

  ix.空白:取新的“Va-YSG”试剂并重复步骤ii-vii。

 

 

◆质量控制检测

 

  a.这项测试需要含有少量TAB阳性菌的可过滤果汁样品作为过程检查。

  b.向10mL离心管中加入1mL阳性样品(浓缩)。加入9mL无菌水或缓冲剂。

  c.80±2°C热击10分钟。

  d.取1mL样品至50mL无菌水中混合。

  e.过滤并把阳性控制储藏在冷冻(-18°C)条件下。

 

相关产品信息请点击文字:愈创木酚测试套装

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